产品货号：
RFT043
中文名称：
彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2～45kD)
英文名称：
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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彩色预染超低分子量蛋白Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本制品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为1.2kD～45kD，分子量大小为1.2、4.6、10、16、27、45kD。
| 组分 | 规格 |
| 彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2～45kD) | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃，有效期1年。
- 第一次收到该产品，常温融化，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底；
- 本制品为即用型溶液，已经含有了上样缓冲液，融化后直接上样，不能加热处理。
一、制胶
- 配制分离胶
- 按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(19:1)、4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
表一：一块厚度1mm凝胶用量成分 分离胶 浓缩胶 18％T,5%C/5mL 5％T,3.3%C/2mL 40% PAA(19:1) 2.25mL / 40% PAA(29:1) / 0.25mL 4×凝胶缓冲液 1.25mL 0.5mL 乙二醇(电泳级) 1.5mL / ddH2O / 1.25mL 10％APS 50μL 20μL TEMED 5μL 2μL - 加入10%APS和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。
- 静置15～30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
- 分离胶25℃时3～5分钟可以聚合；18℃时15分钟可以聚合。
- 按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(19:1)、4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
- 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留的醇吸去。- 按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
- 加入10% APS和TEMED，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 静置20～40分钟待凝胶聚合。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。浓缩胶37℃ 20分钟，25℃ 30分钟，18℃ 40分钟可以聚合。
- 按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
二、电泳
- 电泳缓冲液配制：电泳前，将10×阳极缓冲液(货号：RFT214)和10×阴极缓冲液(货号：RFT227)用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。
- 样品处理：待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(货号：RFT154)等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker已经含有上样缓冲液，彩色预染超低分子量蛋白Marker不能加热处理，融化混匀后直接上样。
- 电泳：向电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品加入点样孔，稳压电泳(电泳条件参考下表)，待指示前沿到达分离胶上沿时，即可停止电泳。
恒电压 150V 起始电流 60～75mA/板胶 结束电流 15～25mA/板胶 电泳时间 ＞2.5h
三、染色
- 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，用适量蒸馏水漂洗，去除胶表面的SDS，残余SDS会导致染色液出现沉淀。
- 弃蒸馏水，加入适量QuickLan蛋白染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，摇床上常温摇动，根据下表确定染色时间。
待检测蛋白量 染色时间 ＞1μg 2分钟 100ng～1μg 10～20分钟 10ng～100ng 30～60分钟
小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
| 40%PAA(29:1)(配制浓缩胶) 丙稀酰胺38.67g 甲叉双丙稀酰胺1.33g 用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用。 贮存：4℃避光保存 | 40% PAA(19:1)(配制分离胶) 丙稀酰胺38g 甲叉双丙稀酰胺2g 用ddH2O溶解后定容至100mL，过滤后使用。 贮存：4℃ |
| 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液) [2M Tris,pH8.9] Tris碱121.1g ddH2O 400mL 用HCl调pH至8.9 用ddH2O定容至500mL 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阳极缓冲液使用 | 10×阴极缓冲液(上槽缓冲液) [1M Tris，1M Tricine，1% SDS，pH8.3] Tris碱121.14g Tricine 179.2g SDS 10g 用水溶解，定容至1L(不用调pH) 贮存：4℃ 注：使用前稀释成1×阴极缓冲液使用 |
| 4×凝胶缓冲液(配制凝胶用) [3M Tris，0.4% SDS，pH8.45] Tris碱36.4g ddH2O 80mL 0.4g SDS或4mL 10％ SDS 用HCl调pH值至8.45 用ddH2O定容至100mL 贮存：4℃ | 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液 1mL 1M Tris-Cl pH6.8 2.4mL甘油 0.8g SDS 0.31g DTT(或者400μL β-巯基乙醇) 2mg考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10mL， 混匀分装-20℃贮存备用 |
| 染色液 冰醋酸100mL 考马斯亮蓝G-250 0.25g 水900mL | 脱色液 冰醋酸100mL 水900mL |
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